植物學(xué)技術(shù)：植物原生質(zhì)體的制備
更新時(shí)間：2014-11-06 瀏覽次數(shù)：2047
原生質(zhì)體是指植物細(xì)胞去掉細(xì)胞壁的裸露部分。它在培養(yǎng)條件下，①具有再生細(xì)胞壁，進(jìn)行連續(xù)的細(xì)胞分裂并再生成完整植株的能力；②具有攝取外源大分子、細(xì)胞器，以及細(xì)菌，病毒的能力，因此是進(jìn)行遺傳操作，基因轉(zhuǎn)移的好材料；③通過(guò)同種和異種植物的原生質(zhì)體融合，可產(chǎn)生異核體，實(shí)現(xiàn)體細(xì)胞雜交，培育出新品種。
實(shí)驗(yàn)原理
去掉植物細(xì)胞壁的方法可以是機(jī)械的人工操作，也可以利用酶解法。較早利用機(jī)械法制備原生質(zhì)體的*Klercker（1892），直到1960 年英國(guó)科學(xué)家Cocking 才*次用酶法大量制備原生質(zhì)體。本實(shí)驗(yàn)以植物的葉肉組織為材料，利用纖維素酶和果膠酶來(lái)消化細(xì)胞壁，分離細(xì)胞。
實(shí)驗(yàn)用品
器具：顯微鏡、離心機(jī)、離心管、剪刀（2）、鑷子（2）、吸管、小培養(yǎng)皿、載片、蓋片。
試劑：0.16mol/L CaCI.2.H2O、20%蔗糖液、酶解液
材料：油菜或菠菜或煙草
實(shí)驗(yàn)方法步驟
1、取材 根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜅l件選取不同的材料
2、分離原生質(zhì)體
① 撕葉下表皮
② 酶解 將撕去下表皮的葉片剪成小塊，放在盛有5mL 酶液的小培養(yǎng)皿中，讓去除下表皮的一面接觸酶液，輔滿一層，在25~28℃下酶解60~90 分鐘
3、收集純化
（1）用吸管將酶解液吸至5mL 離心管中，以600rpm 離心5 分鐘以上，使原生質(zhì)體沉降
（2）將上清（酶解液）回收，剩下原生質(zhì)體及殘?jiān)诠艿?/p>
（3）加氯化鈣液約2mL，輕輕吹打均勻
（4）用注射器向離心管底部緩緩注入蔗糖約2—3mL，出現(xiàn)下部蔗糖液，上部原生質(zhì)體懸浮液
（5）以600rpm 離心10 分鐘，在兩液相之間出現(xiàn)一條綠色帶，便是純凈的原生質(zhì)體
4、觀察或培養(yǎng)
取少許原生質(zhì)體于載片上，蓋片觀察其形態(tài)，或者將原生質(zhì)體接種在培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，再生植株